北京市农林科学院王桂香获国家专利权
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龙图腾网获悉北京市农林科学院申请的专利一种菜薹非转基因突变株的创制方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN111647620B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202010522524.2,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种菜薹非转基因突变株的创制方法是由王桂香;宗梅;刘凡;刘迪;田守卫;韩硕;郭宁;段蒙蒙;缪黎明设计研发完成,并于2020-06-10向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种菜薹非转基因突变株的创制方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种菜薹非转基因突变株的创制方法。本发明所提供的创制白菜非转基因突变株的方法,是通过将CRISPRCas9技术与白菜原位转化技术相结合实现的,具体包括如下步骤:将携带有靶向白菜基因组中目标基因的sgRNA编码序列的CRIPSRCas9基因编辑载体通过真空渗入原位转化的方法导入受体白菜。本发明在2032粒种子中获得了两粒PDS等位基因敲除,率先通过不依赖于组织培养的原位转化技术获得非转基因编辑突变株。编辑效率较之前报道的原位转基因效率大大提高,也为转基因安全和无标记基因编辑提供了一个很好的研究思路。
本发明授权一种菜薹非转基因突变株的创制方法在权利要求书中公布了:1.一种创制白菜非转基因突变株的方法,是通过将CRISPRCas9技术与白菜原位转化技术相结合实现的; 所述方法包括如下步骤: A1将携带有靶向白菜基因组中目标基因的sgRNA编码序列的CRIPSRCas9基因编辑载体导入农杆菌,得到重组农杆菌; A2待受体白菜进入初花期时,按照如下进行浸花处理:将花蕾浸没在所述重组农杆菌的重悬液中,于104Pa负压条件下真空处理10分钟; 在将花蕾浸没在所述重组农杆菌的悬浮液中,于104Pa负压条件下真空处理10分钟的过程中,中间停顿一次;所述中间停顿一次为在5分钟时停顿,待气压缓慢减至常压后,再次加压; A3从经过A2浸花处理的所述受体白菜最终所结种子中获得所述目标基因被敲除的非转基因突变株; 所述白菜为不结球白菜; 所述不结球白菜为菜薹; 所述菜薹为菜薹品种“四九菜心”; 所述CRIPSRCas9基因编辑载体为将pHSE401载体中的标记基因Hyg改造为Bar基因后得到的载体; 所述目标基因为八氢番茄红素脱氢酶基因; 所述靶向白菜基因组中目标基因的sgRNA编码序列中的特异性识别序列如SEQIDNo.1所示。
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