北京中仪康卫医疗器械有限公司冯涛获国家专利权
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龙图腾网获悉北京中仪康卫医疗器械有限公司申请的专利一种对胚胎培养液进行scRRBS分析的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN107760773B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201711016714.1,技术领域涉及:C12Q1/6869;该发明授权一种对胚胎培养液进行scRRBS分析的方法是由冯涛;费嘉;张癸荣;金治平设计研发完成,并于2017-10-26向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种对胚胎培养液进行scRRBS分析的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种对胚胎培养液进行单细胞简化代表性重亚硫酸盐测序Single‑cellreduced‑representationbifulfitesequencing,scRRBS的方法。本发明采用“试管婴儿”操作中的医疗废弃物囊胚培养液为原料,可同时对胚胎的染色体非整倍性状况及DNA甲基化状况进行双重分析,从表观遗传及胚胎与培养环境的反应的全新角度评估胚胎的发育潜能,为在辅助生殖中选择“正确”的胚胎提供了新的参考,对提高“试管婴儿”周期的成功率提供了强力支持。
本发明授权一种对胚胎培养液进行scRRBS分析的方法在权利要求书中公布了:1.一种非诊断目的对胚胎培养液进行单细胞简化代表性重亚硫酸盐测序scRRBS的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1无创样本的获得,通过单精子胞浆内注射法ICSI获得受精卵,受精卵在卵裂球培养基中培养到卵裂球期后转入囊胚培养基中培养至囊胚成熟阶段,对囊胚进行人工皱缩使其排出囊胚腔内液,将培养液全部转移到PCR管中备用; 2构建胚胎培养液的scRRBS测序文库:将步骤1的培养液样本先后经过裂解酶裂解、裂解产物MspⅠ酶切、末端修复及加A、接头连接与接头开环处理、CT转化处理及纯化回收、PCR扩增、纯化与第二次扩增、回收目的产物; 3对步骤2构建的scRRBS测序文库进行测序; 4进行非诊断目的双重分析,包括:获得的数据采用甲基化分析流程解析数据,获得样本的DNA甲基化状态;同时数据采用通用PGS分析流程,分析样本的染色体非整倍性状态; 其中,步骤2中,在MspI酶切中,作为参照DNA的非甲基化λDNA加入量为样本中DNA质量的大约1%;接头连接使用甲基化接头,用T4DNA连接酶连接,16℃预连接30min,然后4℃连接过夜或不低于8小时,连接完成后50-75℃处理20min使酶失活;所述接头是一个发夹结构的序列,在发夹的环状结构中有一个U碱基,用USER酶37℃处理20-50min打开所述接头的环状结构。
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