辽宁德神微生物科技有限公司何随成获国家专利权
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龙图腾网获悉辽宁德神微生物科技有限公司申请的专利基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121109204B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511303171.6,技术领域涉及:C12N1/20;该发明授权基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂及其制备方法是由何随成;李德田;李凌风;陈琛;苏婉;杨志东设计研发完成,并于2025-09-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂及其制备方法在说明书摘要公布了:本发明属于土壤有机质提升剂技术领域,公开了一种基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂及其制备方法,包括组分:复合酶、改性壳聚糖微球复合体、改性聚电解质、抑制剂L‑蛋氨酸亚砜亚胺、底物、辅助因子及复合微生物菌剂。以复合酶体系为核心,通过谷氨酰胺合成酶谷氨酸合成酶循环高效同化土壤铵离子,将其转化为有机氮;并借助多磷酸激酶提供能量保障。改性壳聚糖微球复合体对酶与底物进行保护与缓释,同时通过改性聚电解质实现抑制剂L‑蛋氨酸亚砜亚胺的控制释放,从而调控土壤碳氮平衡。该体系与复合微生物菌剂协同作用,有效解决过度施氮导致的土壤有机质下降问题,同时显著增加作物根系生物量并提高土壤有机质含量。
本发明授权基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂及其制备方法在权利要求书中公布了:1.基于复合微生物菌剂的土壤有机质提升剂,其特征在于,包括以下重量份数组分:0.3-0.5份复合酶、45-60份改性壳聚糖微球复合体、10-15份改性聚电解质、2-8份抑制剂、28-56份底物、5-12份辅助因子、8-15份复合微生物菌剂; 所述复合酶由谷氨酰胺合成酶、谷氨酸合成酶、多磷酸激酶按质量比3:2:4混合制得; 所述改性壳聚糖微球复合体为羧甲基修饰、聚乙二醇接枝、海藻酸钠交联、β-环糊精表面偶联的壳聚糖; 所述改性壳聚糖微球复合体通过以下方法制备得到: S11、将壳聚糖加入去离子水中,加入质量分数为30%NaOH溶液,室温搅拌30min,过滤后,得到碱化壳聚糖溶液;将氯乙酸加入异丙醇中,在60℃下滴加到碱化壳聚糖溶液中,pH保持在8-9,反应2h后,用丙酮沉淀,过滤得到羧甲基壳聚糖; S12、将羧甲基壳聚糖加入PBS缓冲液中,再加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺,室温活化30min,得到活化的羧甲基壳聚糖溶液;将聚乙二醇加入去离子水中,得到聚乙二醇溶液;再将聚乙二醇溶液滴加到活化的羧甲基壳聚糖溶液中,4℃反应4h,期间持续搅拌,最后透析48h得到羧甲基壳聚糖-聚乙二醇溶液; S13、将谷氨酰胺合成酶、谷氨酸合成酶、多磷酸激酶分别加入Tris-HCl缓冲液中,再将上述酶溶液在4℃下预混合30min,得到复合酶预混液;将长链聚磷酸盐、谷氨酸、α-酮戊二酸、二磷酸腺苷、氯化镁、氯化钾混合后加入去离子水中,调节pH至7.2后,得到底物预混液; S14、将海藻酸钠加入去离子水中,再加入聚乙烯醇,加热至完全溶解后,降温至室温,最后加入羧甲基壳聚糖-聚乙二醇溶液,得到海藻酸-羧甲基壳聚糖-聚乙二醇混合液;将复合酶预混液和底物预混液在4℃下混合,再加入谷胱甘肽,得到混合液A,最后将混合液A缓慢加入到海藻酸-羧甲基壳聚糖-聚乙二醇混合液中,得到混合液B;用注射器泵将混合液B滴入CaCl2溶液中,室温交联2h,得到凝胶微球; S15、将凝胶微球加入去离子水中,超声分散后,加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐室温活化30min,用去离子水洗涤3次,每次离心分离,得到活化凝胶微球悬浮液;将β-环糊精加入去离子水中,加热至60℃完全溶解,加入N-羟基琥珀酰亚胺搅拌活化15min,用NaOH溶液调节pH至8.0-8.5,得到β-环糊精活化溶液;将活化凝胶微球悬浮液缓慢加入β-环糊精活化溶液中,在4℃下反应6-8h,期间每30min搅拌一次,再加入Tris-HCl缓冲液,室温搅拌30min,然后离心分离,将沉淀用PBS缓冲液洗涤5次,每次超声分散5min后离心,真空冷冻干燥后得到改性壳聚糖微球复合体; 所述改性聚电解质载体为聚丙烯酸-聚乙烯亚胺复合、金刚烷表面修饰的聚电解质; 所述改性聚电解质通过以下方法制备得到: S21、将聚丙烯酸加入去离子水中,用NaOH调节pH至9.0,室温搅拌45min至完全溶解,得到聚丙烯酸阴离子溶液;将聚乙烯亚胺加入去离子水中,用HCl调节pH至3.0,60℃水浴加热30min,搅拌至完全溶解,得到聚乙烯亚胺阳离子溶液;在剧烈搅拌下,将聚丙烯酸阴离子溶液缓慢滴加到聚乙烯亚胺阳离子溶液中,继续搅拌60min,调节pH至7.0,得到聚丙烯酸-聚乙烯亚胺复合物悬浮液; S22、将聚丙烯酸-聚乙烯亚胺复合物悬浮液转移至高速均质机中均质15min,用0.22μm滤膜过滤,收集滤渣微球,用去离子水洗涤4次,每次离心分离,得到聚电解质微球;将L-蛋氨酸亚砜亚胺在NaOH溶液中调节pH至10.0,得到L-蛋氨酸亚砜亚胺阴离子溶液;将聚电解质微球加入L-蛋氨酸亚砜亚胺阴离子溶液中,在4℃下振荡吸附24h,离心分离并洗涤,得到载药微球; S23、将1-金刚烷甲酸加入N,N-二甲基甲酰胺中,加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化30min,用三乙胺调节pH至8.5,将载药微球分散于PBS缓冲液中,缓慢加入金刚烷活化液,N2保护下反应4h,用二甲基亚砜:H2O混合液洗涤6次,用去离子水洗涤3次,透析袋透析48h,冷冻干燥72h,得到改性聚电解质; 所述抑制剂为L-蛋氨酸亚砜亚胺; 所述底物由长链聚磷酸盐、谷氨酸、α-酮戊二酸、二磷酸腺苷按质量比8:3:2:1混合制得;所述辅助因子由氯化镁、氯化钾按质量比5:3混合制得;所述复合微生物菌剂由放线菌、乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌按体积比5:5:8:20混合制得。
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