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龙图腾网获悉中国农业大学申请的专利一种高通量的转录组测序文库构建方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114622286B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-24发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202011470290.8，技术领域涉及：C40B50/06；该发明授权一种高通量的转录组测序文库构建方法及其应用是由赖锦盛;陈建设计研发完成，并于2020-12-14向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种高通量的转录组测序文库构建方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种高通量的转录组测序文库构建方法及其应用。应用本发明的技术方案，通过在反转录合成cDNA第一链的过程引物一级条形码，实现了不同待测样品文库在同一实验中的并行构建。通过在反转录合成cDNA第一链的过程引物唯一分子识别码，实现了PCR过程产生的重复序列的有效识别和去除。通过引入一级和二级条形码，以及通过基于转录本3’端对基因表达水平进行检测，实现了文库构建和测序的高通量。本发明具有与常规转录组测序相当的基因表达水平检测准确性和表达基因检出效率。同时与常规转录组文库构建和测序相比，本发明具有通量高，成本低的优势，适合于大规模样本的基因表达分析和基因型分析。

本发明授权一种高通量的转录组测序文库构建方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种高通量转录组测序文库的构建方法，包括如下步骤： 1分别提取N个待测样本的总RNA； 2分别以所述各个待测样本的总RNA为模板，利用N条反转录引物反转录得到N个反转录产物，即为N个待测样本的cDNA第一链； 每条所述反转录引物包括反转录引物中测序接头、用于区分不同样本的一级条形码、多聚胸腺嘧啶和3’末端的简并碱基V；所述多聚胸腺嘧啶为15-30nt的连续碱基T；所述简并碱基V为A或C或G； 每个待测样本对应一条所述反转录引物； 所述N条反转录引物中的一级条形码均不同； 每条所述反转录引物还包括用于区分同一样本内同一基因的不同转录本的唯一分子识别码； 所述唯一分子识别码位于所述一级条形码和所述多聚胸腺嘧啶之间； 或所述唯一分子识别码位于所述反转录引物中测序接头和所述一级条形码之间； 3将所述N个反转录产物混合，得到混合cDNA第一链；再用所述混合cDNA第一链合成cDNA第二链，得到双链cDNA； 4用组装有测序接头的Tn5转座酶对所述双链cDNA进行片段化处理，得到片段化产物； 所述组装有测序接头的Tn5转座酶中测序接头与所述反转录引物中的测序接头不同且能够与所述反转录引物中测序接头组成测序接头组； 5将所述片段化产物进行PCR扩增，得到测序文库； 所述PCR扩增通过扩增所需引物对中的至少一条引物引入用于区分不同文库的二级条形码； 所述扩增所需引物对为如下1-3中任一种： 1所示的引物对由M条引物A和引物B组成； 所述引物A包括与所述反转录引物中的测序接头相同或互补的测序接头、用于区分不同文库的二级条形码和与测序芯片结合的测序接头； 每条所述引物B包括与所述Tn5转座酶中测序接头相同或互补的测序接头和与测序芯片结合的另一测序接头； 所述M条引物A中的二级条形码不同； 2所示的引物对由引物C和M条引物D组成； 所述引物C包括与所述反转录引物中的测序接头相同或互补的测序接头和与测序芯片结合的测序接头； 每条所述引物D包括与所述Tn5转座酶中测序接头相同或互补的测序接头、用于区分不同文库的二级条形码和与测序芯片结合的另一测序接头； 所述M条引物D中的二级条形码均不同； 3所示的引物对由M条引物E和M条引物F组成； 每条所述引物E包括与所述反转录引物中的测序接头相同或互补的测序接头、用于区分不同文库的二级条形码和与测序芯片结合的测序接头； 每条所述引物F包括与所述Tn5转座酶中测序接头相同或互补的测序接头、用于区分不同文库的二级条形码和与测序芯片结合的另一测序接头； 所述M条引物E中的二级条形码均不同； 所述M条引物F中的二级条形码均不同。

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